[실험] 그람염색법을 이용한 세균 관찰

 

 

1. 실험 목표

황색포도상구균과 대장균이 그람음성균인지 그람양성균인지 알아본다.

 

 

2. 가설 설정

1. 그람 염색법으로 세균을 염색하였을 때 그람 음성균은 주황색으로 관찰 될 것이다.

2. 그람 염색법으로 세균을 염색하였을 때 그람 양성균은 보라색으로 관찰 될 것이다.

 

 

3. 실험 순서 및 방법

1. 슬라이드 글라스를 알코올로 깨끗이 닦는다.

2. 슬라이드 글라스 위에 멸균 생리식염수 한 방울을 떨어뜨린다.

3. 백금루프로 균을 소량 따서 슬라이드 글라스 위의 생리 식염수에 잘 푼다.

4. 공기 중에서 건조시킨다.

5. 알코올 램프 위를 3-4회 통과시키면서 건조 고정한다.

6. crystal violet 염색액은 2-3방울 떨어뜨리고 1분간 반응한다.

7. 증류수로 염색액을 씻어내고 물기를 제거한다.

8. iodine용액을 2-3방울 떨어뜨리고 1분간 반응한다.

9. 증류수로 염색액을 씻어내고 물기를 제거한다.

10. 에탄올로 탈색시킨다.

11 증류수로 씻어낸다.

12. safranin O 용액을 45초 동안 처리한다.

13. 증류수로 씻고 물기를 흡수 건조시킨다.

14. immersion oil 한 방울을 떨어뜨린 후 커버 글라스를 덮는다.

15. 커버글라스 위에 immersion oil한 방울을 더 떨어뜨리고 현미경으로 관찰

 

 

 

4. 실험 결과

▶ 대장균 그람염색

- 결과

대장균을 그람 염색하였더니 보라색으로 염색되었다. 조사 결과로는 원래 대장균은 그람 음성균이므로 샤프라닌으로   염색되어야 되지만 실험에서는 크리스탈 바이올렛으로 염색되었다.

 

- 원인 분석 탈색 시간의 차이 때문인 것 같다. 대장균을 그람 염색 시킬 때 크리스탈 바이올렛으로 염색한 후 탈색 시간이 짧아 탈색이 되지않아 크리스탈 바이올렛의 색인 보라색이 남아 있는 것으로 보인다.

 

 

▶ 황색포도상구균 그람염색

- 결과

황색포도상구균을 그람 염색하였더니 보라색으로 염색되었다. 그람 염색을 관찰결과 황색포도상구균은 보라색으로 관찰된 것으로 보아 그람 양성균이라는 것을 알 수 있었다.